针对肝癌相关抗原DLK1为靶点的CAR-T疗法
技术描述
DLK1(Delta like homolog 1)，它是我们前期发现的肝癌干细胞标志物基因，表达于干细胞的细胞膜。在正常组织中，DLK1蛋白在胚胎时期高表达，随着细胞的成熟与分化，其表达量逐渐减低，依次为肾上腺、卵巢和睾丸组织。DLK1蛋白包含膜蛋白和分泌蛋白两种形式，我们在肝癌病人的血清中检测到高表达的DLK1蛋白，结合前期研究揭示DLK1可能作为肝癌干祖细胞的分子标志物。我们选择DLK1胞外段区域（24-303aa）我们开发了检测肝癌病人血清DLK1的试剂盒，并申请了专利，专利号为201810027820.8。检测结果发现，在对一百多例患者的血清检查结果发现，血清DLK1抗原的阳性率高。现在已经开发出针对DLK1单克隆抗体可作为诊断肝癌的试剂盒。 同时DLK1在肝癌细胞膜高表达，能够促进肝癌细胞生长，DLK1可作为肝癌干祖细胞标志物对肝癌细胞生长有促进作用。进一步的动物实验研究结果也显示，降低内源DLK1蛋白表达，可以抑制裸鼠移植瘤的生长。 鉴于上述研究基础，我们选择DLK1为靶点, 开发出新型DLK1 CAR-T细胞治疗在肝癌。首先成功建立DLK1嵌合抗原受体T细胞构建体系（已申请专利，专利号为201810042639.4）。实验研究发现DLK1嵌合抗原受体T细胞能够明显抑制肝癌细胞生长，DLK1 CAR-T识别肝癌细胞表面抗原后，T细胞被特异性激活，释放出细胞因子，动物实验表明估DLK1 CAR-T细胞对肝癌的有明显治疗效果。
技术优势
1. 血清蛋白DLK1丰度检测的肝癌早期诊断试剂盒：目前已完成DLK1单克隆抗体的制备，获得了21株单克隆抗体。完成了抗体配对筛选，显示可用于ELISA方法检测，并进行优化，并已筛选出配对最好的两个抗体。已经申请专利： (申请号: 201410499216.7)。基于这些技术研发肝癌分子分型相关基因突变分析检测试剂盒，将用于初发肝癌患者分子分型（检测肿瘤样本、血液等）、以及治疗和随访（血液或血清），观察患者治疗效果和复发。 2.肝癌新型免疫细胞治疗技术开发：是全球首个针对细胞膜抗原DLK1的CAR-T技术。临床前的数据已经在高水平学术杂志和会议上发表，显示该项治疗安全并有高效持久的抗肿瘤疗效。
效果指标
肝癌是全球第五大高发癌症和第二大致死癌症，我国的肝癌患者占全球患者的50%以上，且多是由于乙型肝炎感染、继发肝硬化演变而来。晚期肝癌患者的预后很差，亟需一种高效低毒的新型治疗方法。本项目是全球首个针对细胞膜抗原DLK1的CAR-T技术。临床前的数据已经在高水平学术杂志和会议上发表，显示该项治疗安全并有高效持久的抗肿瘤疗效。 另外，儿童一些肿瘤如肝母细胞瘤、脑胶质瘤等多种恶性肿瘤也是潜在治疗人群，肝母细胞瘤细胞株小鼠效果显著。